镍琼脂糖凝胶FF（Ni Berpharose FF）亲和层析柱介质填料（预装柱）

提示：本公司全部产品均为科研、实验专用试剂，非医疗用途、非药品、非食品、非体外诊断试剂，不可用于动物及人体！

镍-琼脂糖凝胶FF
（Ni-Berpharose FF）
1.产品介绍
镍-琼脂糖凝胶FF 以琼脂糖微球为基质，活化偶联亚氨基二乙酸（IDA），之后螯合Ni2+。IDA 是金属螯合层析中最常用的配体，和次氮基三乙酸（NTA）相比，IDA 具有亲和力强、载量高、可再生重复使用等优点。
镍-琼脂糖凝胶FF 主要用于纯化含有组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。组氨酸标签中的咪唑环同过渡金属Ni2+形成稳定的配位键，能特异、牢固和可逆地吸附在固定有Ni2+的基质上，可通过增加咪唑浓度对重组蛋白进行竞争洗脱。
2.规格
1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml
3.产品性能

性能	指标
基质	6%琼脂糖微球
配基	-N(CH2COOH)2
配基密度	30~40μmol/ml
载量	≥40mg His标签蛋白/ml
粒径	45~165μm
推荐流速/*流速	50~100/700 cm/h
耐反压	0.3MPa
工作温度	4~40℃
pH稳定范围:正常/脱镍	5~12/3~14
储存缓冲液	20%乙醇
储存温度	4-8℃

4.纯化流程
①平衡
镍-琼脂糖凝胶FF 柱用2~5 个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
建议流速为100 cm/h。
②上样
（1）样品一般溶解于pH6~8 的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH 值可以增大载量。
（2）缓冲液中不能含有EDTA 和柠檬酸盐，同时*避免巯基乙醇、DTT 等还原剂。
（3）常用缓冲液有10~100 mM 磷酸钠缓冲液、20~200 mM Tris-HCl 缓冲液等。
（4）缓冲液中一般要加入0.15~0.5 M 的NaCl 以消除离子交换作用。
（5）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF 时，推荐使用50 mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5 M NaCl,pH 7.4）作为初始缓冲液。
③洗脱
（1）增加咪唑浓度进行洗脱是镍-琼脂糖凝胶FF 最常用的洗脱方法。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl 调节pH 值。
（3）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF 时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM 咪唑，浓度从低
到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE 电泳等方法鉴定洗脱结果。
（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。

洗脱方法
（1）降低pH 洗脱：大多数蛋白在pH6~4 会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0~0.5M 咪唑、0~50 mM 组氨酸、0~2M NH4Cl）。梯度洗脱*在起始缓冲液的恒定pH值下进行。
（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白，还会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
注：降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落，下次使用前需要重新螯和金属离子。最常用的方法为竞争性洗脱。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150 ~500mM的NaCl以消除离子交换作用。

5.再生、清洗、保存
①凝胶再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法：用5~10 个柱体积的蒸馏水淋洗柱子，再用5~10 个柱体积的100 mM EDTA 淋洗柱子，*用2~3 个柱体积的0.5 M NaCl 洗掉残留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脱镍后一般需要进行清洗。清洗方法：用0.1~1.0 M NaOH 反向清洗柱子，50 cm/h 保持1~2 h，能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
（3）清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：用2~5 个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，用0.1~0.3 M 金属盐溶液过柱5~10 个柱体积以螯合金属离子，之后用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
②在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：2~3 个柱体积的2 M NaCl 溶液反向清洗。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：4 个柱体积的70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗。
（3）除去蛋白沉淀、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。
6. 注意事项：
1) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。
2) 本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。
3)  2-25℃,常压,避光运输
4）仅供科研实验使用

北京博尔西科技有限公司长期致力于为企业提供诊断试剂原料及科研原料，拥有动物免疫技术，抗原抗体纯化技术，蛋白纯化处理技术等，服务周到，售后完善。

层析柱(预装柱)填料目录：

亲和层析填料(预装柱)

★蛋白A琼脂糖凝胶 FF (Portein A Berpharose FF)

★蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein G Berpharose FF)

★耐碱蛋白A琼脂糖凝胶 FF (rat-Portein A Berpharose FF)

★蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein AG Berpharose FF)

★镍-琼脂糖凝胶FF (Ni- Berpharose FF)

★链霉亲和素琼脂糖凝胶 FF (Streptavidin Berpharose FF)

★Strep-Tactin琼脂糖凝胶 FF (Strep-Tactin Berpharose FF) (StrepII标签蛋白纯化)

★肝素-琼脂糖凝胶 FF (Heparin- Berpharose FF)

★大豆胰蛋白酶抑制剂琼脂糖凝胶 FF (STI- Berpharose FF)

内毒素清除琼脂糖凝胶 (Endotoxin Removal Reagent Berpharose)

GST-琼脂糖凝胶FF (GST Berpharose FF)

钴-琼脂糖凝胶FF (Co- Berpharose FF)

人血清白蛋白琼脂糖凝胶FF (HSA- Berpharose FF)

重组人源血管内皮生长因子亲和琼脂糖凝胶 FF (rh-VEGF Berpharose FF)

重组人碱性成纤维细胞生长因子亲和琼脂糖凝胶 FF (rh-bFGF Berpharose FF)

真菌毒素检测免疫亲和柱

黄曲霉毒素（总量：B族G族、M1、B1）- 免疫亲和柱 (AFT-IAC)

赭曲霉毒素A-免疫亲和柱 (OTA-IAC)

玉米赤霉烯酮-免疫亲和柱 (ZEA-IAC )

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）-免疫亲和柱 (DON-IAC)

T-2毒素-免疫亲和柱 (T-2 toxin-IAC)

伏马毒素-免疫亲和柱 (FB1、FB2、FB3-IAC)

活化填料

NHS活化琼脂糖凝胶 FF (NHS Activated Berpharose FF)

环氧活化琼脂糖凝胶 FF ( Epoxy Activated Berpharose FF)

离子交换层析填料(预装柱)

DEAE-琼脂糖凝胶 FF（DEAE Berpharose FF）

Q-琼脂糖凝胶FF（Q Berpharose FF）

CM-琼脂糖凝胶FF（CM Berpharose FF）

SP-琼脂糖凝胶FF（SP Berpharose FF）

DEAE、Q、CM、SP（预装柱套装4支）

疏水层析填料(预装柱)

苯基-琼脂糖凝胶 FF（Phenyl Berpharose FF）

辛基-琼脂糖凝胶 FF（Octyl Berpharose FF）

丁基-琼脂糖凝胶 FF（Butyl Berpharose FF）

苯基、辛基、丁基（预装柱套装3支）

凝胶过滤层析填料(预装柱)

型号	分离范围
琼葡糖凝胶G10	<700
琼葡糖凝胶 G15（脱盐柱）	100-1500
琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱)	1000-5000
琼葡糖凝胶 G50	1000-30000
琼葡糖凝胶 G75	3000-80000
琼葡糖凝胶 G100	4000-120000
琼葡糖凝胶 G150	5000-300000
琼葡糖凝胶 G200	5000-600000

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