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- 品牌:bersee博尔西
- 产地:北京
- 货号:BTR204Q
- 价格: ¥600/支
- 发布日期: 2020-11-19
- 更新日期: 2025-04-24
产地 | 北京 |
品牌 | bersee博尔西 |
货号 | BTR204Q |
用途 | 免疫沉淀 免疫共沉淀凝胶 |
包装规格 | 1ml |
纯度 | 99%% |
CAS编号 | |
是否进口 | 否 |
提示:本公司全部产品均为科研、实验专用试剂,非医疗用途、非药品、非食品、非体外诊断试剂,不可用于动物及人体!
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF
(Protein AG-Berpharose FF)
产品介绍
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF 是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A 或蛋白G分离介质相比,具有更宽广的结合范围,同时融合后的r-PAG 降低了对pH值的依赖,允许在pH5-8进行结合。本产品多用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,及抗体固定及其它相关研究。
规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、25ml、100ml、500ml
3.产品性能
性能 | 指标 |
基质 | 4%琼脂糖微球 |
配基 | 蛋白A蛋白G融合蛋白 |
配基密度 | >4mg/ml |
载量 | ≥20mg人IgG /ml |
粒径 | 45-165μm |
*耐压 | 0.3Mpa |
推荐流速 | 50-300 cm/h |
pH稳定范围 | 3-10 |
储存缓冲液 | 20%乙醇 |
储存温度 | 4-8℃ |
5.纯化流程
以免疫共沉淀(Co-IP)举例:
结合缓冲液:20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,PH3.0
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5
(注:所用过柱液体在使用之前建议用至少小于等于0.45μm 滤膜过滤)
(1)样品预处理:细胞、植物、动物组织裂解液样品,最终总蛋白浓度选择在 0.5-1.0ug/ul 范围内为宜,上样前要确保样品溶液拥有合适的离子强度和 pH 值(如:可以用结合缓冲液对样品液进行稀释或透析);哺乳动物细胞内有多种成分可以和 IgG 发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带,可通过加入Normal IgG 和Protein AG-Berpharose FF的方式预处理裂解液样品,以降低非特异性结合。
(2)抗原-抗体复合物制备:将抗体与含有目的蛋白的裂解液混合,室温震荡孵育 30-60min(或4-8 度孵育过夜),形成抗原-抗体复合物(可根据已优化好的抗原抗体结合条件处理)。
(注意:抗体的加入量要依据填料量,抗体的加入量过多会影响到抗原-抗体混合物与填料的结合,故建议抗体加入量为填料载量的80%)
(3)填料平衡:取适量的Protein AG Berpharose FF 加入到 2ml 离心管中,500 r离心1min,弃上清,加入 0.5ml 结合缓冲液,悬浮填料,500 r离心 1min,弃上清,重复两次。
(4)抗原-抗体复合物的吸附:将抗原-抗体复合物加入到平衡好的填料中,均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管, 促使样品和填料充分接触并吸附,约 30min 后,500 r离心 1min,取上清液,留样检测。
(5) 除杂清洗:向上述离心管中加入 0.5ml 的结合缓冲液,悬浮填料,进行清洗,500 r离心 1min,吸弃上清,重复两次。
(6)抗原洗脱:
①非变性洗脱法(洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析):向离心管中加入 5 倍柱体积的洗脱缓冲液,用移液器吹打 5 次, 混匀,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min 后,500 r离心 1min,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标抗原,收集上清液至新的离心管中,并立即加入十分之一体积的中和缓冲液中和缓冲液调节其pH至中性,用于后期功能分析。
②变性洗脱法(洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测):向离心管中加入 25ul 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均 匀,95℃ 加热 5min。然后进行离心,200 r离心 1min,收集上清液,进行 SDS-PAGE 电泳,转膜后进行
Western 分析。