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免疫沉淀 免疫共沉淀凝胶 蛋白AG琼脂糖凝胶FF(ProteinAG Berpharose FF)
物品单位 价格 品牌
600 bersee博尔西
  • 产地:北京
  • 货号:BTR204Q
  • 发布日期: 2020-11-19
  • 更新日期: 2020-11-19
产品详细说明
产地 北京
品牌 bersee博尔西
货号 BTR204Q
用途范围 免疫沉淀 免疫共沉淀凝胶
纯度 99%%
CAS编号
规格 1ml
是否进口

提示:本公司全部产品均为科研、实验专用试剂,非医疗用途、非药品、非食品、非体外诊断试剂,不可用于动物及人体!


蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF

Protein AG-Berpharose FF

  1. 产品介绍

蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF 是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。同单独的蛋白A 或蛋白G分离介质相比,具有更宽广的结合范围,同时融合后的r-PAG 降低了对pH值的依赖,允许在pH5-8进行结合。本产品多用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,及抗体固定及其它相关研究。

  1. 规格

1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、25ml100ml500ml

3.产品性能

性能

指标

基质

4%琼脂糖微球

配基

蛋白A蛋白G融合蛋白

配基密度

>4mg/ml

载量

≥20mgIgG /ml

粒径

45-165μm

*耐压

0.3Mpa

推荐流速

50-300 cm/h

pH稳定范围

3-10

储存缓冲液

20%乙醇

储存温度

4-8

5.纯化流程

以免疫共沉淀(Co-IP)举例:

结合缓冲液:20mM磷酸缓冲液、150mMNaClpH7.0

洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,PH3.0

中和缓冲液:1 M Tris-HClpH 8.5

(注:所用过柱液体在使用之前建议用至少小于等于0.45μm 滤膜过滤)

1)样品预处理:细胞、植物、动物组织裂解液样品,最终总蛋白浓度选择在 0.5-1.0ug/ul 范围内为宜,上样前要确保样品溶液拥有合适的离子强度和 pH 值(如:可以用结合缓冲液对样品液进行稀释或透析);哺乳动物细胞内有多种成分可以和 IgG 发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带,可通过加入Normal IgG Protein AG-Berpharose FF的方式预处理裂解液样品,以降低非特异性结合。

2)抗原-抗体复合物制备:将抗体与含有目的蛋白的裂解液混合,室温震荡孵育 30-60min(或4-8 度孵育过夜),形成抗原-抗体复合物(可根据已优化好的抗原抗体结合条件处理)。

注意:抗体的加入量要依据填料量,抗体的加入量过多会影响到抗原-抗体混合物与填料的结合,故建议抗体加入量为填料载量的80%

3)填料平衡:取适量的Protein AG Berpharose FF 加入到 2ml 离心管中,500 r离心1min,弃上清,加入 0.5ml 结合缓冲液,悬浮填料,500 r离心 1min,弃上清,重复两次。

4)抗原-抗体复合物的吸附:将抗原-抗体复合物加入到平衡好的填料中,均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管, 促使样品和填料充分接触并吸附,约 30min 后,500 r离心 1min,取上清液,留样检测

5 除杂清洗:向上述离心管中加入 0.5ml 的结合缓冲液,悬浮填料,进行清洗,500 r离心 1min,吸弃上清,重复两次。

6)抗原洗脱:

①非变性洗脱法(洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析):向离心管中加入 5 倍柱体积的洗脱缓冲液,用移液器吹打 5 次, 混匀,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管10min 后,500 r离心 1min,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标抗原,收集上清液至新的离心管中,并立即加入十分之一体积的中和缓冲液中和缓冲液调节其pH至中性,用于后期功能分析。

     ②变性洗脱法(洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测):向离心管中加入 25ul  1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均        匀,95 加热 5min。然后进行离心,200 r离心 1min,收集上清液,进行 SDS-PAGE 电泳,转膜后进行

       Western 分析。


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