| 产地 | 北京 |
|---|---|
| 品牌 | bersee博尔西 |
| 货号 | BTR208Q |
| 用途范围 | 蛋白纯化等 |
| 纯度 | 99%% |
| 规格 | 1ml预装柱 |
| 是否进口 | 否 |
提示：本公司全部产品均为科研、实验专用试剂，非医疗用途、非药品、非食品、非体外诊断试剂，不可用于动物及人体！
钴-琼脂糖凝胶FF
（Co-Berpharose FF）
1.产品介绍
钴-琼脂糖凝胶FF(NTA)以琼脂糖微球为基质，活化偶联次氮基三乙酸（NTA），之后螯合Co2+。钴 NTA 琼脂糖凝胶 FF 具特异性好，螯合钴更稳定，不易脱落，能耐受更高的还原剂，物理和化学稳定性好。
钴-琼脂糖凝胶FF主要用于纯化含有组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。组氨酸标签中的咪唑环同过渡金属Ni2+形成稳定的配位键，能特异、牢固和可逆地吸附在固定有Co2+的基质上，可通过增加咪唑浓度对重组蛋白进行竞争洗脱。
2.规格
1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml
3.产品性能
| 性能 | 指标 |
| 基质 | 4%琼脂糖微球 |
| 配基 | -N(CH2COOH)2 |
| 配基密度 | 30~40μmol/ml |
| 载量 | ≥20mg His标签蛋白/ml |
| 粒径 | 45~165μm |
| 推荐流速 | 50-300 cm/h |
| 耐压 | 0.3MPa |
| 工作温度 | 4~40℃ |
| pH稳定范围:正常/脱钴 | 5~12/3~14 |
| 储存缓冲液 | 20%乙醇 |
| 储存温度 | 4-8℃ |
4.纯化流程
①平衡
钴-琼脂糖凝胶FF 柱用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。建议流速为100 cm/h。
②上样
（1）样品一般溶解在pH6-9 的初始缓冲液中，提高上样缓冲液的pH 值，可以增大载量。
（2）缓冲液中不能含有EDTA 和柠檬酸盐，也*不含巯基乙醇、DTT 等还原剂。
（3）常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl 缓冲液等。
（4）在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M 的NaCl，以消除离子交换作用。
（5）在初次使用钴琼脂糖凝胶FF，推荐使用50mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH 调节pH 7.4）作为初始缓冲液。
3、洗脱
（1）钴琼脂糖凝胶FF 最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl 进行调节pH。
（3）在初次使用钴琼脂糖凝胶FF，不知道洗脱的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别
加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM 咪唑，浓度从低到高，分别洗
脱和收集，通过SDS-PAGE 电泳等方法鉴定。
（4）有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱，确定较佳洗脱条件。
洗脱方法
（1）降低pH 洗脱：大多数蛋白在pH6~4 会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0~0.5M 咪唑、0~50 mM 组氨酸、0~2M NH4Cl）。梯度洗脱*在起始缓冲液的恒定pH值下进行。
（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白，还会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
注：降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落，下次使用前需要重新螯和金属离子。最常用的方法为竞争性洗脱。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150 ~500mM的NaCl以消除离子交换作用。
5.再生、清洗、保存
①凝胶再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱钴再生。脱钴方法：用5~10 个柱体积的蒸馏水淋洗柱子，再用5~10 个柱体积的100 mM EDTA 淋洗柱子，*用2~3 个柱体积的0.5 M NaCl 洗掉残留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脱钴后一般需要进行清洗。清洗方法：用0.1~1.0 M NaOH 反向清洗柱子，50 cm/h 保持1~2 h，能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
（3）清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：用2~5 个柱体积的蒸馏水充分平衡脱钴后的柱子，用0.1~0.3 M 金属盐溶液过柱5~10 个柱体积以螯合金属离子，之后用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
②在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：2~3 个柱体积的2 M NaCl 溶液反向清洗。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：4 个柱体积的70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗。
6. 注意事项：
1) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。
2) 本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。
3) 2-25℃,常压,避光运输
4）仅供科研实验使用
北京博尔西科技有限公司长期致力于为企业提供诊断试剂原料及科研原料，拥有动物免疫技术，抗原抗体纯化技术，蛋白纯化处理技术等，服务周到，售后完善。
层析柱(预装柱)填料目录：
亲和层析填料(预装柱)
★蛋白A琼脂糖凝胶 FF (Portein A Berpharose FF)
★蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein G Berpharose FF)
★耐碱蛋白A琼脂糖凝胶 FF (rat-Portein A Berpharose FF)
★蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶 FF (Portein AG Berpharose FF)
★镍-琼脂糖凝胶FF (Ni- Berpharose FF)
★链霉亲和素琼脂糖凝胶 FF (Streptavidin Berpharose FF)
★Strep-Tactin琼脂糖凝胶 FF (Strep-Tactin Berpharose FF) (StrepII标签蛋白纯化)
★肝素-琼脂糖凝胶 FF (Heparin- Berpharose FF)
★大豆胰蛋白酶抑制剂琼脂糖凝胶 FF (STI- Berpharose FF)
内毒素清除琼脂糖凝胶 (Endotoxin Removal Reagent Berpharose)
GST-琼脂糖凝胶FF (GST Berpharose FF)
钴-琼脂糖凝胶FF (Co- Berpharose FF)
人血清白蛋白琼脂糖凝胶FF (HSA- Berpharose FF)
重组人源血管内皮生长因子亲和琼脂糖凝胶 FF (rh-VEGF Berpharose FF)
重组人碱性成纤维细胞生长因子亲和琼脂糖凝胶 FF (rh-bFGF Berpharose FF)
北京博尔西科技有限公司长期致力于为企业提供诊断试剂原料及科研原料，拥有动物免疫技术，抗原抗体纯化技术，蛋白纯化处理技术等，服务周到，售后完善。
